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El uso de gallinas para la producción de anticuerpos policlonales, reduce la intervención animal, obteniendo además una gran cantidad de anticuerpos. Las aves presentan mayor distancia filogenética entre sus antígenos y los de mamíferos ofreciendo altos porcentajes de anticuerpos específicos. La producción de anticuerpos requiere antígenos en cantidades considerables, por ello es creciente el uso de proteínas recombinantes para tales fines. No obstante, la obtención de proteínas en sistemas heterólogos conduce frecuentemente a la precipitación en agregados insolubles de limitada utilidad (cuerpos de inclusión).
Este trabajo presenta una metodología para la producción de anticuerpos policlonales (IgYs) empleando cuerpos de inclusión (CI) como antígeno. Los CI purificados e inoculados corresponden a la Nicotinamida / Nicotinato Mononucleotido Adenililtranferasa (His-GiNMNAT) de Giardia intestinalis expresada en Escherichia coli. La purificación del antígeno se llevó a cabo mediante solubilización y renaturalización. Los anticuerpos se purificaron de la yema de huevo de gallinas imunizadas mediante dilución en agua, seguida de precipitación con sulfato de amonio al 60% y afinidad tiofilica. Los anticuerpos fueron evaluados mediante inmunoblot empleando la proteína His-GiNMNAT. De una yema de huevo se obtuvieron 14,4 mg de IgYs, con alta pureza y con un reconocimiento de hasta 15ng de His-GiNMNAT. Se mejoró la especificidad de los IgYs mediante una purificación adicional por afinidad al antígeno, lo cual permitiría su empleo para el reconocimiento de la proteína del parásito.
Introducción
Los protozoos del género Giardia son considerados modelos biológicos de gran interés en razón a su posición evolutiva basal, metabolismo reducido y simplicidad estructural. Son parásitos de mamíferos que constituyen un problema de salud pública, humana y veterinaria a nivel mundial (1). Giardia intestinalis es un eucariota ancestral con vías metabólicas simplificadas, similares a las procariotas, muchas de las cuales permanecen sin ser dilucidadas.
El Dinucleótido de Nicotinamida y Adenina (NAD+) en sus diversas formas (NAD+, NADH, NADP+, NADPH+) tiene un rol fundamental como cofactor de óxido-reductasas, tanto en reacciones catabólicas, como en procesos anabólicos (2-4). Adicionalmente, en la última década se ha acumulado evidencia sobre el papel del NAD+ como sustrato para la modificación covalente de proteínas y la generación de movilizadores de calcio (3, 5, 6).
Esta es una versión de prueba de citación de documentos de la Biblioteca Virtual Pro. Puede contener errores. Lo invitamos a consultar los manuales de citación de las respectivas fuentes.
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