Resumen

La Arkadia humana es una proteína nuclear formada por 989 residuos de aminoácidos, con un característico dominio RING en su extremo C. El dominio RING alberga la actividad ubiquitina ligasa E3 que necesita Arkadia para ubiquitinar sus sustratos, como los reguladores negativos de la señalización del TGF-β. El dominio de dedo RING de Arkadia es de tipo RING-H2 y su estructura y estabilidad depende en gran medida de la presencia de dos iones Zn(II) unidos al marco proteico a través de un motivo definido Cys3-His2-Cys3. En el presente trabajo transformamos el dominio dedo de Arkadia de tipo RING-H2 a una secuencia RING no nativa, sustituyendo los residuos de unión a zinc Cys955 o His960 por Arginina, mediante mutagénesis dirigida al sitio. La expresión recombinante, en Escherichia coli, de los mutantes C955R y H960R revela un rendimiento significativamente menor respecto al polipéptido nativo del dominio dedo RING-H2 de Arkadia. En particular, sólo el mutante C955R presenta un rendimiento de expresión suficiente para el aislamiento de la proteína recombinante y los estudios preliminares. Las mediciones de absorción atómica y el análisis preliminar de los datos de RMN revelan que la mutación puntual C955R en el dominio RING Finger de Arkadia disminuye drásticamente la afinidad de unión al zinc, lo que conduce a la ruptura de la integridad estructural global de la construcción RING.

• Materias:Carbono Células Ácido desoxirribonucleico (ADN) Plomo Bioinorgánica
• Subjects:Carbon Cells Deoxyribonucleic acid (DNA) Lead Bioinorganics
• Palabras claves:dominio de arkadia, dominio de dedo anular, tipo h2, análisis de datos de nmr, dominio de dedo h2, secuencia anular no nativa, dominio de dedo de arkadia, actividades de ubiquitina ligasa, integridad estructural global, expresión de muestra mutante
• Keywords:domain of arkadia, ring finger domain, h2 type, nmr data analysis, h2 finger domain, nonnative ring sequence, arkadia finger domain, ubiquitin ligase activities, global structural integrity, mutant exhibit expression