Resumen

En la detección y diferenciación de los serogrupos de Vibrio cholerae se utilizó una nueva reacción en cadena de la polimerasa (TMPCR) sensible y específica para cada locus, basada en la amplificación en dos etapas correspondiente a la PCR multiplex y la estrategia de touchdown condicional. Un panel de marcadores moleculares basado en el método TMPCR genera perfiles reproducibles de amplicones específicos de V. cholerae (588 pb) derivados del gen ompW que codifica la proteína de la membrana externa y amplicones específicos de los serogrupos, 364 pb para el O1 y 256 pb para el O139, auténticamente copiados de los genes rfb responsables de la biosíntesis del lipopolisacárido. La eficacia de la amplificación de la TMPCR produce bandas de ADN dúplex igualmente o desigualmente detectables del O1 (588 y 364 pb) y del O139 (588 y 256 pb) o un fragmento de ADN no O1/no O139 (588 pb), mientras que no proporciona identificaciones falsas positivas utilizando las plantillas de ADN genómico de los otros vibrios y Enterobacteriaceae. El análisis recíproco de las combinaciones de dos plantillas demostró que, utilizando V. cholerae O1, O139 o O1 y O139 igualmente mezclados, la TMPCR tenía un límite de detección de tan sólo 100 pg del O1, O139 o no O1/no O139 en reacciones que contenían ADNg desigual o igualmente mezclado. Además, el método TMPCR específico para el serogrupo O tenía 100 de acuerdo con el método de serotipificación cuando se examinaron las cepas de referencia de V. cholerae serotipificadas y las recuperadas de muestras clínicas. El beneficio potencial de utilizar esta herramienta TMPCR aumentaría el método de serotipificación utilizado en la vigilancia epidemiológica y el seguimiento de los serogrupos de V. cholerae, O1, O139 y no O1/no O139 presentes en muestras clínicas y ambientales.

• Materias:Bioquímica Proteínas Plantas medicinales Bioquímica vegetal Farmacología
• Subjects:Biochemistry Proteins Medicinal plant Plant biochemistry Pharmacology
• Palabras claves:pb, o139, plantilla de adn genómico, rendimiento de la eficacia de amplificación, reacción en cadena de la polimerasa, proteína de la membrana externa, estrategia de anotación condicional, serogrupos de vibrio cholerae, métodos tmpcr basados, o1
• Keywords:bp, o139, genomic dna template, amplification efficiency yield, polymerase chain reaction, outer membrane protein, conditional touchdown strategy, vibrio cholerae serogroups, based tmpcr methods, o1