Resumen

La alquilación del ADN puede causar mutaciones, cambios epigenéticos e incluso la muerte celular. Todos los organismos vivos han desarrollado estrategias enzimáticas y no enzimáticas para reparar estos daños por alquilación. AlkB, una de las proteínas de respuesta adaptativa de Escherichia coli, utiliza un mecanismo dependiente de α-cetoglutarato/Fe(II) que, mediante oxidación química, elimina diversas lesiones alquílicas del ADN, protegiendo así el genoma contra la alquilación. En un esfuerzo por comprender la gama de sustratos aceptables para AlkB, la enzima se incubó con oligonucleótidos sintetizados químicamente que contenían lesiones alquílicas, y los productos de reacción se analizaron mediante espectrometría de masas de ionización por electrospray de tiempo de vuelo (ESI-TOF). En consonancia con la literatura, pero estudiado comparativamente aquí por primera vez, se encontró que 1-metiladenina, 1,N 6-etenoadenina, 3-metilcitosina, y 3-etilcitosina fueron completamente transformados por AlkB, mientras que 1-metilguanina y 3-metiltimina fueron parcialmente reparados. Se informa por primera vez de los intermediarios de reparación (epóxido y posiblemente glicol) de la 3,N 4-etenocitosina. También se demuestra que la O 6-metilguanina y la 5-metilcitosina son refractarias a AlkB, lo que apoya la hipótesis de que AlkB sólo repara las lesiones alquílicas unidas a los átomos de nitrógeno de la nucleobase. La espectrometría de masas ESI-TOF demuestra ser una herramienta sensible y eficaz para sondear las especificidades comparativas de sustrato de las proteínas de reparación del ADN in vitro.

• Materias:Pliegue de Proteína Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ácidos nucleicos Reparación del ADN Daño del ADN
• Subjects:Protein Folding Polymerase chain reaction Nucleic acids DNA Repair DNA Damage
• Palabras claves:alkb, lesiones de alquilo, primera vez, proteínas reparadoras del adn, espectrometría de masas tof, proteínas de respuesta adaptativa, especificidades de sustrato comparativas, tiempo de ionización electrospray, tales daños por alquilación, esi
• Keywords:alkb, alkyl lesions, first time, dna repair proteins, tof mass spectrometry, adaptive response proteins, comparative substrate specificities, electrospray ionization time, such alkylation damage, esi