Resumen

Cuando una ADN polimerasa replicativa se detiene al encontrar una lesión en la cadena molde, es relevada por otra(s) polimerasa(s) de baja procesividad, que inserta(n) nucleótido(s) frente a la lesión, se extiende(n) unos pocos nucleótidos y se disocia(n) del 3′-OH. La polimerasa replicativa reanuda entonces la síntesis de ADN. Este proceso, denominado replicación translesional (TLS) o bypass replicativo, puede implicar al menos a cinco polimerasas diferentes en mamíferos, aunque las polimerasas participantes y sus funciones no se han caracterizado por completo. Utilizando siRNAs diseñados originalmente y una técnica de sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa alcalina, verificamos la implicación de varias polimerasas en la TLS inducida por luz ultravioleta (UV) en células HeLa. En primer lugar, los ARNsi dirigidos a Rev3 o Rev7 abolieron en gran medida la TLS inducida por UV, lo que sugiere que estos 2 productos génicos, que comprenden Polζ, desempeñan un papel principal en la TLS mutagénica. En segundo lugar, el siRNA dirigido a Rev1 también suprimió la UV-TLS, lo que indica que Rev1 también es indispensable para la TLS mutagénica. En tercer lugar, el siRNA dirigido a Polη también impidió el TLS en mayor medida de lo que esperábamos. En cuarto lugar, aunque el siRNA dirigido a Polι no tuvo ningún efecto detectable, el dirigido a Polκ retrasó la UV-TLS. Hasta donde sabemos, éste es el primer estudio que aporta pruebas aparentes de la participación de Polκ en la UV-TLS.

• Materias:Pliegue de Proteína Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Ácidos nucleicos Reparación del ADN Daño del ADN
• Subjects:Protein Folding Polymerase chain reaction Nucleic acids DNA Repair DNA Damage
• Palabras claves:tls, sirna, tls mutagénicos, técnica de sedimentación en gradiente de densidad de sacarosa alcalina, estancamiento de la polimerasa de adn replicativa, polκ, lesión, sirnas, síntesis de adn, células hela
• Keywords:tls, sirna, mutagenic tls, alkaline sucrose density gradient sedimentation technique, replicative dna polymerase stalls, polκ, lesion, sirnas, dna synthesis, hela cells