Resumen

Establecimiento de un sistema de puntuación semiautomático para ensayos histoquímicos e inmunohistoquímicos para evaluar diferenciación condrogénica in vitro. Durante la formación embriológica de las extremidades, las células mesenquimales se condensan y se diferencian en condrocitos, en un proceso conocido como condrogénesis. Estos condrocitos sintetizan glicosaminoglicanos (GAG), por lo que juegan un papel importante en este proceso. Se ha demostrado un sistema simplificado de condrogénesis in vitro, que utiliza células estromales mesenquimales (MSC) adultas. Este potencial de diferenciación generalmente se evalúa mediante tinción histológica. Objetivo. Establecimiento de un sistema de clasificación semiautomático para tinciones histoquímicas y ensayos de inmunohistoquímica. Materiales y métodos. Para la condrogénesis, las células se cultivaron durante tres semanas en agregados con medio inductor. Los GAG totales se midieron utilizando el método de azul de dimetilmetileno (DMB). Para los análisis histológicos, los agregados se tiñeron con azul Alcian para la detección de GAG totales y se realizó inmunohistoquímica (IHC) para agrecano. La clasificación semiautomática para todos los portaobjetos se obtuvo después del análisis de ImageJ. Resultados. Las MSC cultivadas como agregados en medios de diferenciación condrogénica tenían concentraciones de proteína similares para todos los puntos de tiempo, lo que sugiere que la celularidad permaneció homogénea durante el cultivo. El total de GAG fue mayor para los agregados cultivados en condrogénicos en comparación con los medios completos. Se observó la misma tendencia para los grados de tinción de azul alcián mediante un observador ciego y un análisis utilizando el software ImageJ. El análisis IHC de Aggrecan tuvo una tendencia decreciente con el tiempo para los agregados en medios condrogénicos para la evaluación del observador ciego y de ImageJ. Conclusión. Desarrollamos un sistema funcional para la clasificación de diapositivas semiautomática. Corroboramos estos resultados mediante análisis bioquímicos con resultados comparables. Hasta donde sabemos, para la condrogénesis in vitro, este es el primer informe para evaluar tinciones utilizando esta metodología. Este procedimiento podría ser útil para otras aplicaciones en el campo de la Biología y las Ciencias Médicas.

INTRODUCCIÓN

​La condrogénesis, primer paso en la formación del hueso endocondral, es un proceso en el que el esqueleto se origina a partir de un molde de cartílago o anlagen (1, 2).

• Materias:Cultivo de celulas Células Cultivo in vitro
• Subjects:Cell culture Cells In vitro culture
• Palabras claves:Células estromales mesenquimales; Condrogénesis in vitro; Glicosaminoglicanos; Imagej.
• Keywords:Mesenchymal stromal cells; In vitro chondrogenesis; Glycosaminoglycans; Imagej.