Resumen

Aquí presentamos el diseño, síntesis y caracterización de sondas fluorescentes altamente sensibles, específicas y estables en sistemas biológicos para la detección de mutaciones puntuales en el ADN. Se construyeron tándems de oligo(2′-O-metilribonucleótidos) conjugados con 3′- y 5′-mono- y bis-pireno, protegidos por 3′-timidina "invertida", y se estudió su potencial como nuevos instrumentos para el diagnóstico genético. Se ha demostrado que las nuevas sondas tienen la capacidad de formar dúplex estables con el ADN diana debido al efecto estabilizador de las múltiples unidades de pireno en la unión. Se ha estudiado la relación entre las propiedades fluorescentes de las sondas desarrolladas, el número de residuos de pireno en la unión en tándem y la localización de la mutación puntual. Basándonos en los datos obtenidos, hemos elegido las sondas que poseen la mayor intensidad de fluorescencia junto con la mejor capacidad de discriminación de desajustes y de detección de deleciones e inserciones. La aplicación de las sondas desarrolladas para la detección del polimorfismo C677T en el gen MTHFR se ha demostrado en sistemas modelo.

• Materias:Genética Molecular Ácido ribonucleico (ARN) Reacción en cadena de la polimerasa (PCR) Daño del ADN Mutación genética
• Subjects:Molecular Genetic Ribonucleic acid (RNA) Polymerase chain reaction DNA Damage Genetic mutation
• Palabras claves:sondas, sistemas biológicos sondas fluorescentes, mejor discriminación de desajustes, mayor intensidad de fluorescencia, capacidad de detección de inserciones, múltiples unidades de pireno, detección de mutaciones puntuales, polimorfismo c677t, diana de adn, gen mthfr
• Keywords:probes, biological systems fluorescent probes, best mismatch discrimination, highest fluorescence intensity, insertion detection ability, multiple pyrene units, point mutation detection, polymorphism c677t, dna target, mthfr gene