Resumen

Se desarrolló y validó un sencillo ensayo de cromatografía líquida de ultraperformance-espectrometría de masas en tándem para medir el nivel de cortisol en la saliva humana. Las muestras de saliva que contenían cortisol se enriquecieron con tolperisona como estándar interno (IS) y se extrajeron con una mezcla de metil tert-butil éter y hexano (8:2, v:v). Tras la evaporación del disolvente, el residuo se reconstituyó en 100 μl de fase móvil. El análisis se realizó en una columna Atlantis dC18 (2,1 × 100 mm, tamaño de partícula de 3 μm) con una fase móvil compuesta por acetonitrilo y acetato de amonio 2 mM (50:50, v:v) y suministrada a un flujo de 0,3 ml/minuto. La adquisición por espectrometría de masas se realizó con monitorización de reacción múltiple en modo de iones positivos para el cortisol y el IS (m/z: 363,1 → 121,0 y 246,0 → 97,9, respectivamente). Los tiempos de retención del cortisol y del IS fueron de aproximadamente 1,35 y 2,45 minutos, respectivamente. La relación entre el nivel de cortisol y la relación del área del pico de cortisol con el IS fue lineal en el rango de 0,5-100 ng/ml. El coeficiente de variación intra e interdiaria y el sesgo fueron ≤ 9,0 y ≤12,0%, respectivamente. Las recuperaciones medias de extracción de cortisol e IS de las muestras de saliva fueron del 92 y 94%, respectivamente. Utilizando el método, se encontró que el cortisol era ≥ 86% estable en muestras de saliva procesadas (24 horas a temperatura ambiente o 48 horas a -20°C) y ≥ 91% estable en muestras no procesadas (24 horas a temperatura ambiente o 20 semanas a -20°C). Además, el método se aplicó con éxito para determinar el perfil diario de cortisol en muestras de saliva de un voluntario sano.

• Materias:Cinética química Química farmacéutica Análisis químico Método espectrofotométrico
• Subjects:Chemical kinetics Chemistry pharmaceutical Chemical test Spectrophotometric method
• Palabras claves:fase móvil, muestra de saliva, temperatura ambiente, nivel de cortisol, relación de área de pico, mezcla de metilos, medición de cortisol, mm de acetato de amonio, recuperación de cortisol, columna atlantis dc18
• Keywords:mobile phase, saliva sample, room temperature, cortisol level, peak area ratio, mixture of methyl, measurement of cortisol, mm ammonium acetate, recovery of cortisol, atlantis dc18 column