Resumen

Methanosarcina mazei es uno de los organismos modelo del orden metanogénico Methanosarcinales cuyo metabolismo ha sido estudiado en detalle. Sin embargo, el conjunto de herramientas genéticas sigue siendo limitado. El objetivo de este estudio es ampliar el alcance de los métodos utilizables en este grupo de organismos. (i) Las proteínas específicas de los metanógenos son a menudo difíciles de producir en E. coli. Sin embargo, no se dispone de un sistema de producción de proteínas para metanógenos. Aquí presentamos un sistema inducible para producir proteínas marcadas con Strep en Ms. mazei. El promotor p1687, que dirige la transcripción de las metiltransferasas que desmetilan las metilaminas, se clonó en el plásmido pWM321 y su actividad se determinó monitorizando la producción de β-glucuronidasa. El promotor era inactivo durante el crecimiento en metanol, pero se activaba rápidamente cuando se añadía trimetilamina al medio. El gen que codifica la β-glucuronidasa de E. coli se fusionó con una etiqueta Strep y se clonó a continuación del promotor p1687. La proteína se sobreprodujo en Ms. mazei y se purificó en forma activa mediante cromatografía de afinidad. (ii) La puromicina es actualmente el único antibiótico utilizado como marcador seleccionable en Ms. mazei y sus parientes. Establecimos la resistencia a la neomicina como segundo marcador seleccionable diseñando un plásmido que confiere resistencia a la neomicina en Ms. mazei.

• Materias:Bioquímica Ácido ribonucleico (ARN) Arqueas Biogénesis
• Subjects:Biochemistry Ribonucleic acid (RNA) Archeas Biogenesis
• Palabras claves:ms. mazei, resistencia a la neomicina, segundo marcador seleccionable, orden metanogénico methanosarcinales, sistema de producción de proteínas, grupo de organismos, transcripción de metilos, methanosarcina mazei, clonación descendente, coli
• Keywords:ms. mazei, neomycin resistance, second selectable marker, methanogenic order methanosarcinales, protein production system, group of organisms, transcription of methyl, methanosarcina mazei, cloned downstream, coli