Resumen

Antecedentes y Propósito: La GFP (proteína verde fluorescente) se utiliza ampliamente en diversos métodos fluorescentes destinados a revelar el destino de las proteínas en la célula, el transporte intracelular, la eficiencia de transfección y también se recomienda para el análisis del ciclo celular. En nuestro intento por evaluar el papel de los genes nm23 en la proliferación de células tumorales de cabeza y cuello en cultivo, decidimos utilizar el sistema de reportero EGFP y analizar el contenido de ADN mediante citometría de flujo.

Materiales y Métodos: Para optimizar el método, transfectamos transitoriamente las células con constructos pEGFPC1-nm23 o co-transfectamos las células con constructos que portan nm23 y pEGFPC1 como sistema de reportero. Establecimos clones estables con constructos pEGFPC1-nm23 y los analizamos también mediante citometría de flujo.

Resultados y Conclusiones: Informamos nuestra experiencia en el uso del sistema de reportero pEGFP y la citometría de flujo para determinar la distribución del ciclo celular en células tumorales adherentes transfectadas transitoriamente y de manera estable. Discutimos brevemente el protocolo que utilizamos y los problemas que surgieron durante nuestros experimentos, como el desvanecimiento de GFP, la aglomeración y degradación celular, y el número insuficiente de células para analizar. En conclusión, sugerimos consejos útiles para evitar o minimizar los problemas técnicos de este método y mejorar los resultados y el análisis.

• Materias:Acetamida
• Subjects:Acetamida
• Palabras claves:GFP; Citometría de flujo; Análisis del ciclo celular; Células adherentes; Transfección
• Keywords:GFP; Flow cytometry; Cell-cycle analysis; Adherent cells; Transfection