Optimización de la extracción de ADN de passiflora ligularis para el análisis por medio de marcadores moleculares

Extraction of high quality DNA of passiflora ligularis for Its analysis with molecular markers

El conocimiento de la distribución de la variabilidad genética es de suma importancia para el desarrollo de estrategias de conservación efectivas. La variabilidad puede ser muy diferente entre especies y entre poblaciones de una misma especie; el conocimiento de esta variabilidad puede ser de gran interés para programas de selección y mejoramiento de especies con valor comercial y ambiental. Las técnicas de biología molecular y, en particular, el uso de marcadores moleculares permiten conocer, caracterizar y estimar la diversidad genética y las relaciones entre grupos de interés.

El objetivo del estudio realizado fue estandarizar un protocolo de extracción de ADN eficiente y preciso para Passiflora ligularis. Se evaluaron dos métodos de extracción de ADN y dos tipos de tejido de Passiflora ligularis en términos de pureza, calidad y cantidad de ADN obtenido, al igual que su aplicabilidad en técnicas moleculares basadas en PCR (polymerase chain reaction) como los RAPD (random amplified polymorphic DNA).

La cuantificación de ADN se realizó mediante espectrofotometría de absorbancia a una longitud de onda de 260nm (A260) usando el espectrofotómetro Beckman Du^® 530; de igual manera se obtuvo una estimación de la pureza del ADN por medio de la relación de absorbancia (A260/A280nm). En el estudio se analizaron las siguientes variables: el método de extracción (A) y el tipo de tejido (B), con el fin de definir la influencia que éstas tuvieron en la pureza y cantidad de ADN extraído. Para el estudio de estas variables se usó un diseño aleatorio con arreglo factorial 2 x 2.

Como resultado, se obtuvo que la cantidad promedio de ADN obtenido con el método de Mc Couch et al. (1988) modificado y Doyle & Doyle (1991) modificado fue 778,9 µg/ml y 660,1 µg/ml respectivamente para el tejido seco, para el tejido fresco los promedios fueron 1543,3 µg/ml y 820,4 µg/ml respectivamente. Los dos métodos de extracción con tejido fresco produjeron ADN de buena calidad para la amplificación mediante métodos de PCR como los marcadores RAPD. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos se propone que con el método de Mc Couch et al. (1988) y utilizando tejido foliar fresco se obtiene un ADN de óptima calidad para ser utilizado en los marcadores RAPD.

La biotecnología en el mejoramiento de especies arbóreas forestales: tendencias y prioridades de la investigación

Biotechnology in forest tree improvement : research directions and priorities

En ningún otro sector de la investigación científica se está avanzando hoy tan rápidamente como en el de la biotecnología vegetal. La biotecnología agrupa diferentes técnicas que utilizan organismos vivos para fabricar o modificar un producto, mejorar plantas o animales y desarrollar microorganismos con fines específicos. Profunda impresión suscitaron en la opinión pública ciertos descubrimientos lanzados con grandes campañas publicitarias, como el tomate que resiste al frío, y la yuca y otros cultivos modificados mediante ingeniería genética, para aumentar su resistencia a los insectos y virus, que están o estarán próximamente disponibles en el mercado.

La investigación sobre mejoramiento de especies arbóreas se divide en dos categorías: la investigación complementaria ―como por ejemplo, la recolección de datos sobre biología reproductora y genética necesarios para llevar a cabo una selección eficaz―, y la investigación estratégica, cuya finalidad es elaborar métodos mejorados de selección. Según la opinión de algunos autores (por ejemplo Sedgley y Griffin, 1989), muchos proyectos de investigación estratégica relacionados con la biotecnología se han realizado a expensas de otras actividades necesarias de mejoramiento de especies arbóreas.

Lógicamente, es importante establecer el orden de prioridad de los objetivos con cautela y recurrir a la biotecnología sólo si se posee un profundo conocimiento de las especies en que se realizan los experimentos. No obstante, si se dispone de información y conocimientos biológicos básicos, y existen programas idóneos de mejoramiento de especies forestales, la biotecnología puede ser un instrumento valioso. Este análisis está orientado a definir las principales prioridades de la investigación biotecnológica en materia de mejoramiento de especies arbóreas forestales.