Diagnóstico bioquímico positivo en pacientes con sospecha clínica de Niemann Pick C

Positive Biochemical Diagnosis in Patients with Clinical Suspicion of Niemann Pick C

Se realizó diagnóstico bioquímico en cultivos de fibroblastos, provenientes de biopsias de piel de 73 pacientes candidatos clínicamente de padecer la enfermedad neurodegenerativa de herencia autosómica recesiva de Niemann Pick C, remitidos por los servicios de neurología y genética del país. Mediante análisis cualitativo de intensidad de fluorescencia perinuclear por tinción de Filipin, se reportaron 23 pacientes positivos (11 Mujeres/12 Hombres). La prueba t permitió inferir que no existen diferencias estadísticamente significativas en relación a la edad (1 ->45 años) y el género de los pacientes.

1. INTRODUCCIÓN

Niemann Pick C (NPC) es una enfermedad neurodegenerativa con un patrón de herencia autosómica recesiva, caracterizada por deficiencia en el transporte intracelular de colesterol no esterificado, producido por la acumulación de glucoesfingolípidos en los lisosomas [1, 2, 3]. Su incidencia es de 1:120000 nacidos vivos. La expresión de la enfermedad ha sido asociada a las mutaciones en los genes NPC1 y NPC2 localizados en los cromosomas 18 y 14, loci (q11-q12) y (q24.3) respectivamente [4]. Las proteínas que codifican estos genes están involucradas en la exportación adecuada de colesterol y es posible que actúen de forma conjunta para regular el transporte lipídico intracelular y su homeostasis [5] (tabla 1). Mutaciones en estos genes generan disfuncionalidad, lo que altera el transporte lipídico y conduce a la acumulación de colesterol en los lisosomas [6].

1.1. Metodología

Medios de cultivo y suplementos. Minimum Essential Medium Eagle (MEM, Gibco-Invitrogen): suplementado con el 20 % de Suero Fetal Bovino, Antibiótico-Antimicótico (Anti-Anti, Gibco-Invitrogen), L-Glutamina, Lipoproteína –LDL-(L7914, 50mg/ml Sigma) y Filipin III from Streptomyces filipinensis (Sigma).

Aspectos éticos. Al momento de la toma de muestra biológica se diligenció el consentimiento informado de todos los pacientes o sus tutores responsables.

Cultivos de fibroblastos y condicionesin vitro. Se evaluaron 73 pacientes a partir de biopsias de piel de 3-6 mm (Epidermis); tomadas por personal especializado. Se establecieron por duplicado los cultivos de fibroblastos en monocapa a 37◦C en presencia de Humedad relativa de 95 % y 5 % de concentración de CO₂, con un tiempo máximo de procesamiento de 24 horas después de la recolección de la muestra biológica. Se establecieron cultivos controles provenientes de pacientes con resultado previo negativo, con las mismas condiciones para comparar morfología y monitorear la prueba bioquímica empleada.