Operational Evaluation of the Rapid Viability PCR Method for Post-Decontamination Clearance Sampling

Evaluación operativa del método de PCR de viabilidad rápida para el muestreo de separación posterior a la descontaminación

El método de Reacción en Cadena de la Polimerasa de Viabilidad Rápida (RV-PCR) se evaluó durante la Prueba y Evaluación Operativa de Bio-Respuesta (BOTE), un proyecto interinstitucional para evaluar la remediación biológica de instalaciones a nivel de campo, utilizando tecnologías de descontaminación líderes. Las pruebas se realizaron utilizando una liberación intencional (aerosolización) de esporas de Bacillus atrophaeus subespecie globigii (BG), como sustituto de Bacillus anthracis, el agente etiológico para el ántrax. Se evaluaron tres métodos de descontaminación, incluida la fumigación con peróxido de hidrógeno vaporizado (VHP), la fumigación con dióxido de cloro (CD) y un proceso de tratamiento de superficie con blanqueador con pH ajustado. El método RV-PCR se desarrolló para detectar rápidamente esporas de B. anthracis vivas durante un evento de bioterrorismo. El método utiliza un cambio en la respuesta de PCR en tiempo real antes y después de un paso de incubación de nueve horas, para determinar la presencia de esporas bacterianas viables en la muestra; El método se verificó recientemente para muestras de filtro de aire, toallitas húmedas y agua a nivel de 10 esporas para esporas de B. anthracis Ames, y también se desarrolló para muestras de hisopos, esponjas y calcetines / filtros de vacío. En el método, el procesamiento de muestras de alto rendimiento se combina con el análisis basado en PCR antes y después de un paso de cultivo rápido para acelerar la determinación de viabilidad, especialmente para muestras complejas de superficie y ambientales que presentan desafíos a los métodos actuales basados en cultivos. En el proyecto BOTE, se analizaron un total de 159 muestras de limpieza superficial de eventos posteriores a la descontaminación dividiendo la suspensión después de la recuperación de esporas en dos partes iguales, con una parte analizada por RV-PCR y la otra parte por cultivo después de concentrar al mismo volumen. En el proyecto BOTE, el método RV-PCR proporcionó resultados rápidos para muestras posteriores a la descontaminación que fueron 98% (156/159 muestras) consistentes con los resultados del análisis de cultivo. El porcentaje de acuerdo fue notable, dada la gran cantidad de muestras que contienen bajos niveles de esporas. Para las muestras de eventos Post-VHP, Post-Bleach y Post-CD, el porcentaje de acuerdo fue del 93% (41/44 muestras), 100% (47/47 muestras) y 100% (68/68 muestras), respectivamente . El método RV-PCR funcionó bien para las esporas sustitutivas de BG expuestas a descontaminantes a niveles de aplicación reales, y con muestras de barrido que contenían desechos de fondo y poblaciones microbianas indígenas. El método RV-PCR proporcionó resultados rápidos para las muestras posteriores a la descontaminación que fueron del 98% (156/159 muestras) consistentes con los resultados del análisis de cultivo.