A rapid and simple capillary electrophoresis procedure for quantification of vanillylmandelic acid in urine samples

Un procedimiento de electroforesis capilar rápido y simple para la cuantificación de ácido vanililmandélico en muestras de orina

Objetivo: desarrollar un método de extracción líquido-líquido asistido por vórtice (MELLAV) de un solo paso, sin la necesidad de pasos de evaporación y reconstitución, para establecer un procedimiento de tratamiento rápido y sencillo basado en electroforesis capilar con detección por arreglo de diodos (EC-DAD) para la determinación de ácido vanillilmandélico (AVM) en orina humana. Metodología: se estudió en detalle la optimización de los procedimientos MELLAV y EC-DAD. Se investigaron los efectos de varios parámetros experimentales, como el tipo de solvente de extracción, el pH de la muestra, la adición de sal y el tiempo de extracción. Además, también se optimizaron las condiciones de separación EC, incluyendo el tipo de electrolito de fondo, la concentración y el pH, el tiempo de inyección y el voltaje de separación. Resultados: se logró una separación exitosa de AVM en menos de 6 min utilizando un electrolito de fondo básico compuesto por 60 mmol·L-1 de acetato/ACN (acetonitrilo) al 50 % (v/v) (el pH aparente final es 5,73). La respuesta lineal se obtuvo en el rango de concentración de 1,0 a 14 μg·mL-1. El límite de detección y cuantificación fue de 0,30 a 1,0 μg·mL-1, respectivamente. Se encontró que las precisiones intra e interdiarias eran inferiores al 4,3 %. Las recuperaciones de extracción de AVM estuvieron entre 95%-97%. Conclusión: el método desarrollado resulta ser un método simple, rápido y confiable para el análisis cuantitativo de AVM en orina.

INTRODUCCIÓN

El ácido vanililmandélico (VMA, ácido DL-4-hidroxi-3-metoxibencenoacético con una masa molar de 198,2 g-mole^-1, para la estructura química del VMA, véase la figura 1) es el producto final del metabolismo de la epinefrina y la norepinefrina en el cuerpo humano [1]. Se sabe que la concentración de VMA, como biomarcador bien establecido, aumenta en diversas enfermedades como el autismo [2], el neuroblastoma [3], el feocromocitoma [4] y los tumores de la cresta neural [5], mientras que puede disminuir en afecciones como la depresión [6]. Debido a su recogida fácil y no invasiva, las muestras de orina se utilizan a menudo para determinar la VMA en el diagnóstico clínico [7]. Las concentraciones normales de VMA en individuos sanos varían en un amplio rango en orina según los valores descritos en la literatura, es decir, de 11,6 a 28,7 μmol-L^-1` (o de 2,3 a 5,7 μg-mL^-1) [8].

Se han descrito varias técnicas analíticas de separación, a saber, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) con detección electroquímica (ECD) [9-12], detección por fluorescencia (FLD) [13-16] o espectrometría de masas (MS) [17-24] y cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS) [25-27] o detector de ionización de llama [28] para la determinación de VMA. La HPLC-ECD requiere una preparación laboriosa de la muestra y mucho tiempo de análisis [19].