Validación de una metodología analítica para la cuantificación por HPLC de quercetina en una matriz vegetal

Validation of an analytical methodology for the quantification by high performance liquid chromatography of quercetin in a vegetal matrix

El presente documento expone el trabajo involucrado alrededor de la implementación de una metodología para la cuantificación del flavonoide quercetina en cebolla (Allium cepa). Contemplando el aporte de investigaciones previas, se optimizaron y estandarizaron las variables del método (tiempos de hidrólisis y extracción del material vegetal) y se realizó el proceso de validación. Esta última, resultó exitosa, y permite afirmar que en el material vegetal seco de cebolla blanca se encuentra 1960 mg de quercetina/ Kg y en cebolla roja 2701 mg de quercetina/ Kg.

Introducción

Los flavonoides son compuestos orgánicos casi universales en los vegetales (1). La quercetina es un flavonoide del tipo flavonol que se encuentra presente en diversos alimentos naturales, tales como: tomate, lechuga, cebolla, apio, repollo, brócoli, arvejas, espinacas, manzana, naranja, fresa, durazno, pera y uva; siendo las cebollas, uno de los vegetales más ricos en ella. ( 2-13).

Las cebollas son ricas en dos grupos químicos que han sido destacados como benéficos para la salud del hombre: los flavonoides y los alquil-cistein-sulfóxidos (ACSOs). Dentro de los flavonoides se encuentran dos subgrupos: las antocianidinas, las cuales imparten el color rojo/púrpura a algunas variedades y los flavonoles, como la quercetina (presente mayoritariamente en el bulbo), el kamferol (abundante en las hojas) y sus derivados, responsables del color amarillo de otras variedades.

Existe un interés especial en los flavonoides debido a sus posibles efectos en la salud humana. Se sabe que al menos el 60% de los cánceres humanos se relacionan con factores extrínsecos identificables, los que pueden ser de carácter físico, químico o biológico ( 1 4).

Aun cuando es difícil evaluar la contribución exacta de cada factor, se reconoce el papel preponderante que ocupa la dieta y en general la ingesta de ciertos compuestos en  el  control  de la aparición y desarrollo del cáncer. Dentro de estos compuestos de interés, se encuentran los flavonoides, moléculas que poseen actividad anticarcinogénica, aunque estudios recientes parecen contradecir esta afirmación (15).

Se requiere por tanto, métodos de análisis validados que permitan la determinación del contenido de estas sustancias en alimentos y en fluidos biológicos para así estimar la relación de su consumo con la incidencia de alguna enfermedad o protección contra las mismas.

Metodología

Equipos: Cromatógrafo líquido de alta eficiencia (HPLC) Waters: Sistema controlador 600E, detector UV 486, módulo de datos 746; columna LiChroCART (Dorck, Darmstadt, Germany) 250 x 4 mm 1.0., Purospher RP - 18 endcapped, 5 µm, guarda columna LiChroCART (Merck, Darmstadt, Germany) 4 x 4 mm 1.0., LiChrospher RP - 18, 5 µm. Cromatógrafo HPLC Merck Hitachi LaChrom: Bomba L - 7100, detector de arreglo de diodos L- 7450, automuestreador L- 7200, interfase D - 7000, programa: Chromato­ graphy data station software D - 7000 Multi - HSM_H (este equipo fue exclusivamente usado en la evaluación de especificidad).