Validation of an analytical methodology by gas chromatography for the assay of barbiturates in blood samples

Validación de una metodología analítica para la determinación de barbitúricos en muestras de sangre por cromatografía gaseosa con detector de ionización de llama

Una metodología analítica fue desarrollada y validada para la determinación de butabarbital, pentobarbital y fenobarbital en muestras de sangre, utilizando aprobarbital como estándar interno. Para la identificación de los diferentes fármacos se llevó a cabo una extracción líquido-líquido con posterior separación cromatográfica empleando una columna capilar en modo de inyección pulsado sin división con rampa de temperatura, helio como gas de arrastre y detector de ionización de llama. La metodología validada fue selectiva, lineal, precisa y exacta. La linealidad fue evaluada para concentraciones entre 20 y 100 mcg/mL para cada uno de los tres barbitúricos. La metodología desarrollada se aplicó en dos casos forenses presentados en el Laboratorio de Toxicología del Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses en Bogotá.

INTRODUCCIÓN

Al Instituto Nacional de Medicina Legal y Ciencias Forenses (INMFC) llegan numerosos casos asociados a intoxicaciones por una gran variedad de sustancias. Algunas de esas sustancias son las benzodiacepinas, las drogas recreativas ilegales y los barbitúricos. Estas intoxicaciones están relacionadas con actos delictivos como el robo y los delitos sexuales. De ahí la importancia de la identificación y cuantificación de estas sustancias.

En el campo de la medicina forense, se utilizan varias pruebas preliminares o de cribado para la identificación de estas sustancias. Los más utilizados son los métodos inmunoenzimáticos, que a pesar de su alta sensibilidad pueden mostrar una falta de selectividad y por lo tanto pueden producir falsos positivos. Por esta razón, y para confirmar cualquier resultado positivo preliminar, se utilizan técnicas cromatográficas. 

En la determinación de barbitúricos se utilizan técnicas de cromatografía líquida (1-4) y de cromatografía de gases (5-9). Wand et al. informaron del uso de la electroforesis capilar micelar para el análisis de dos barbitúricos, el barbital y el fenobarbital (10). En esta investigación, se presentan los resultados del desarrollo y la validación de un método cromatográfico de gases para la determinación de butabarbital, pentobarbital y fenobarbital en muestras de sangre. Se utilizó el aprobarbital como estándar interno. Para la validación de la metodología se utilizaron los parámetros y directrices de la FDA (11), así como algunas recomendaciones de otros autores (12, 13).

FASE EXPERIMENTAL DE DESARROLLO

Instrumentación y materiales

El análisis se llevó a cabo mediante cromatografía de gases Hewlett Packard (Mod. 6890, EE.UU.) equipada con un detector de ionización de llama y nitrógeno/fósforo, un inyector split/splitless, una serie automática y el sistema de datos GC/HP Chemstation (Mod. 7683, EE.UU.).