Purificación y determinación de carbohidratos en la vicilina de Canavalia ensiformis

Purification and carbohydrate determination of vicilin from Canavalia ensiformis

Este estudio reporta la purificación y determinación de carbohidratos en la vicilina de Canavalia ensiformis ( Jack bean). La vicilina se purificó por precipitación isoeléctrica a pH 6,4 y 4,8, cromatografía de intercambio iónico (DEAE-Sephadex A-50) y cromatografía de afinidad (Con A -Sepharosa 4B). La pureza de la proteína se verificó por SDS-PAGE y su identidad se confirmó por espectrometría de masas empleando la técnica de ionización MALDI (desorción-ionización con láser asistida por una matriz) en un espectrómetro de tiempo de vuelo (TOF) obteniéndose un espectro de masas característico de la proteína (PMF) (MALDI-TOF-PMF). La oxidación de residuos glicosídicos en la vicilina demostró la presencia de carbohidratos en la proteína, lo cual se corroboró por deglicosilación enzimática con Péptido N-glicosidasa F (PNGasa F) y por el método de Dubois, el cual mostró un contenido de carbohidratos del 4,03% en la proteína. Estos resultados muestran, por primera vez, la presencia de glicósidos en la vicilina de Canavalia ensiformis.  El proceso de purificación de la vicilina de la semilla de Canavalia ensiformis, desarrollado en este trabajo, permitió obtener la proteína con un grado de pureza muy superior al descrito previamente en la literatura.

Introducción

En las semillas de leguminosas se encuentran presentes varios tipos de proteínas entre las cuales se hallan las proteínas de reserva. Dichas proteínas son globulinas, las cuales se clasifican de acuerdo con su coeficiente de sedimentación en dos tipos: globulinas 11S o leguminas y globulinas 7S o vicilinas, siendo generalmente más abundantes las vicilinas (1). Aunque frecuentemente se utilizan nombres triviales para identificar estas proteínas, dependiendo de la especie de la cual provengan, los términos leguminas (11S) y vicilinas (7S) son comúnmente usados (1, 2, 3, 4).

Los estudios más recientes sobre vicilinas de leguminosas están orientados hacia la investigación de su efecto antimicrobial (5), su participación en la resistencia de semillas al ataque por insectos (6) y como alérgeno presente en alimentos (7, 8, 9). Igualmente, debido al valor nutricional de estas proteínas, se han realizado estudios sobre sus propiedades fisicoquímicas, funcionales y estructurales (10, 11, 12).

Las vicilinas son trímeros cuyas subunidades tienen una Mr alrededor de 45-55 kDa (13, 14) y en la mayoría de los casos las subunidades no están unidas por puentes disulfuro (1).