Comparación de cuatro métodos de restauración del ADN en muestras de plasma y láminas de citología cérvico-uterina como una herramienta para mejorar la calidad de la muestra

Comparison of four methods of DNA restoration in samples from plasma and pap smears as a tool for better the samples.

Objetivos: comparar cuatro métodos de restauración del ADN en plasma y láminas cérvico-uterinas como una herramienta para mejorar la calidad de la muestra. Métodos: a 20 muestras de plasma sanguíneo y 20 muestras de láminas citológicas, se les realizó aislamiento de ADN mediante kit comercial y fenol-cloroformo. A todas las muestras se les realizó un tratamiento pre-PCR con cuatro diferentes tipos de actividad de ADN polimerasa: 1. Exonucleasa y endonucleasa 5’-3’. 2. Exonucleasa 5’-3’. 3. Klenow, y 4. Klenow más ligasa. Los diferentes métodos se evaluaron mediante PCR en tiempo real con el gen ALU. Resultados: todos los métodos de restauración mejoran la calidad del ADN en los dos tipos de muestras. El método 3 mostró mejores resultados en plasma y en lámina, incrementando la concentración del ADN de 0,0022 ng/μL a 0,6474 ng/μL en láminas de citología y de 0,0039 ng/μL a 0,435 ng/ μL en plasma sanguíneo. Conclusiones: ADN de las muestras de plasma y lámina al ser tratadas con un proceso de restauración aumenta la calidad del ADN en comparación a las muestras no tratadas.

Introducción

El cáncer cervical es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en mujeres (1, 2). La tasa de incidencia anual del cáncer cervical en el mundo es de 529.409 nuevos casos; es la primera causa de muerte en mujeres en países en desarrollo y la segunda en el mundo, aun cuando se trata de una patología altamente curable al ser detectada a tiempo (3, 4). La detección temprana es efectiva, porque las lesiones precursoras se desarrollan algunas veces lentamente en el cáncer invasivo, típicamente durante un período mayor a diez años (5); estas lesiones precursoras (displasias o neoplasias intraepiteliales cervicales) son detectables con la citología cervical.

En los países donde la citología ha sido introducida, los índices de cáncer cervical se han reducido sustancialmente (5). Las muestras de láminas de citología cérvico-uterinas son una fuente importante para el estudio de VPH en pacientes con cáncer. Con todo esto, los datos no son precisos debido a que los procesos en sí mismos producen contaminaciones y alteraciones que pueden afectar el ADN, siendo contraproducente para los resultados de los estudios (6).