Determinación cualitativa de algunos metabolitos de seis glucocorticoides en orina a través de cromatografía líquida de alta eficiencia acoplada a masas-masas

Qualitative determination of metabolites in urine of six glucocorticoids by high performance liquid chromatography coupled to mass-spectrometry

El uso de glucocorticoides está prohibido en el campo deportivo durante las competencias si son administrados por vía sistémica, para lo cual, WADA definió un nivel de reporte de 30 ng/mL para los compuestos padre y sus metabolitos. En este trabajo se desarrolló una metodología analítica para la determinación cualitativa de los principales metabolitos de algunos glucocorticoides sintéticos: betametasona, budesonida, dexametasona, metilprednisolona, prednisolona y triamcinolona acetónido, presentes en muestras de orina conservadas por el Laboratorio de Control al Dopaje de Coldeportes. La metodología incluyó una comparación entre la extracción de los analitos libres y conjugados con glucurónido (para determinar cuál de las dos fracciones era más útil en el análisis de estas sustancias), su separación por cromatografía líquida de alta eficiencia con ionización positiva y la detección por medio de trampa iónica (HPLC-MS/MS). Se seleccionaron los metabolitos mayoritarios a través de sus tiempos de retención, posteriormente se fragmentaron para obtener sus espectros y por medio de la abundancia se determinó la cantidad presente en cada fracción (libre y conjugada). Se identificaron los seis glucocorticoides y un total de doce metabolitos, que permitirán hacer un rastreo más prolongado del consumo de las sustancias. Además, se confirmó que las cantidades para la mayoría de los compuestos de interés, fueron más altas en la fracción libre de las muestras de orina, pero no es posible eliminar el proceso de hidrólisis porque algunos metabolitos se excretan conjugados.

Introducción

Los glucocorticoides constituyen un grupo de moléculas conocidas inicialmente por su actividad como reguladoras del metabolismo de carbohidratos y que más adelante evidenciaron propiedades sobre distintos sistemas, como el cardiovascular e inmunitario, riñones, músculo estriado, endocrino y nervioso [1]. Dada su capacidad antiinflamatoria y analgésica, su uso se extendió rápidamente dentro del deporte; sin embargo, otras de sus propiedades farmacológicas sugieren que en la práctica podrían aumentar el rendimiento de los deportistas, teniendo en cuenta que a nivel metabólico crean reservas de glucógeno en tejido muscular y aceleran los mecanismos de lipólisis y glucólisis, inducidos por catecolaminas y la hormona de crecimiento, lo que lleva a la utilización más eficiente de las fuentes de energía por los músculos durante la actividad física [2]. Además, su acción en los receptores cerebrales atenúa las impresiones centrales de la fatiga y gracias a los ya nombrados efectos antiinflamatorios y analgésicos, inhiben las sensaciones de dolor muscular por el esfuerzo, así como también, elevan el umbral de fatiga. Otras fuentes indican que los glucocorticoides en el deporte también producirían euforia e incremento en la actividad motora [3].