Production and purification of igy antibodies as a novel tool to purify the nr1 subunit of NMDA recepto

Producción y purificación de anticuerpos igy como una herramienta novedosa para purificar la subunidad nr1 del receptor NMDA

La producción de anticuerpos policlonales (IgY) en pollos tiene ventajas sobre los obtenidos en otros modelos animales, ya que se han utilizado como herramienta para el estudio de diferentes proteínas (el receptor de glutamato NMDA en nuestro caso, concretamente la subunidad NR1). Produjimos anticuerpos específicos contra productos de expresión mediante el empalme alternativo del gen que codifica la subunidad del receptor NMDA NR1 en el cerebro de ratas adultas. Se diseñaron, sintetizaron y utilizaron individualmente tres péptidos correspondientes a los sitios de empalme (cassettes N1, C1 y C2ꞌ) como antígenos en las gallinas. Las inmunoglobulinas específicas fueron purificadas de las yemas de huevo. Los anticuerpos se utilizaron luego para purificar la subunidad del receptor NMDA NR1 mediante cromatografía de afinidad que acopló los tres anticuerpos al soporte.

INTRODUCCIÓN

Las IgG de los pollos (IgY) tienen algunas características fisicoquímicas que las diferencian de las IgG de los mamíferos (1). Por ejemplo, no interactúan con los factores reumatoides, no activan el sistema del complemento humano, no se unen a la proteína A de Staphylococcus sp., a la proteína G ni a los receptores Fc de las células de los mamíferos, de manera que la probabilidad de que se den falsos positivos en los ensayos inmunológicos se reduce considerablemente (2, 3, 4).

En la naturaleza, las IgY se encuentran en dos formas: una completa y otra truncada. Ambas pueden coexistir en un mismo individuo, como ocurre en algunas tortugas y en los patos (5). La forma completa tiene una masa molecular de 180 kDa y (como todas las inmunoglobulinas de bajo peso) dos cadenas pesadas (H) y dos ligeras (L). Las cadenas H tienen regiones variables (V) y constantes (C) con cuatro dominios de inmunoglobulina, lo que explica su gran tamaño (6). La forma truncada tiene un peso molecular de 120 kDa, ya que ha perdido los dominios CH3 y CH4 de las cadenas H, convirtiéndose en una molécula de fragmento similar al F(abꞌ)2.

Los receptores ionotrópicos de glutamato están directamente relacionados con los procesos de potenciación a largo plazo (LTP), como la memoria y el aprendizaje. Este tipo de receptores se ha subdividido en tres grupos debido al uso de diferentes agonistas externos; estos grupos se conocen como N-Methyl-DAspartate (NMDA), AMPA y Kainate, parecen tener gran similitud estructural y funcional, aunque los procesos en los que intervienen pueden ser diferentes o complementarios.