Determinación de los compuestos cianogénicos amigdalina y prunasina en semillas de almendras (Prunus dulcis L.) mediante cromatografía líquida de alta resolución

Determination of cyanogenic compound amygdalin and prunasin in almond kernels (Prunus dulcis L.) by using liquid chromatography

El objetivo del presente trabajo fue aplicar un técnica para determinar y cuantificar por separado los compuestos cianogénicos que pueden estar presentes en la semilla de almendra madura (Prunus dulcis). Entre los métodos encontrados, se seleccionó la cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC), que permite la cuantificación de los glucósidos cianogénicos amigdalina y prunasina por separado, adecuando diferentes procedimientos de extracción como el tamaño de partículas que influye en el proceso de liofilización, donde a menor superficie mayor área de contacto para la sublimación. Se ensayaron  muestras sin grasa y con grasa, utilizando los resultados con muestras con grasa, dados los resultados obtenidos. Se utilizó metanol 100% como extractante de los glucósidos cianogénicos, resultando una concentración de amigdalina máxima a partir un tiempo de extracción de 12 h y como fase móvil acetonitrilo/agua (20:80), se obtiene amigdalina, con una concentración de 9,8 mg/100g de muestra seca. Los cromatogramas obtenidos presentan tiempos de retención (Tr), Amigdalina: 3,4 min y Prunasina, 5,7 min, dos picos con excelente resolución, por lo tanto las condiciones anteriores se pueden utilizar para la identificación y  cuantificación de amigdalina y prunasina.

Introducción

Los glucósidos cianogénicos son el producto del metabolismo secundario en la síntesis de compuestos propios de las plantas que se componen de una aglicona tipo α-hidroxinitrilo y de un azúcar, principalmente D-glucosa (1). La distribución de los glucósidos cianogénicos (GC) en el reino vegetal es relativamente amplia llegando a, por lo menos, 2500 cultivares, entre los que una gran cantidad pertenecen a las familias Fabaceae, Rosaceae, Linaceae, Compositae y otras.

Los glucósidos cianogénicos son un grupo conocido y se presentan en las especies del género Prunus, es decir, almendros, damascos, durazneros, nectarinos, cerezos, entre otros (2, 3). La característica de producir ácido cianhídrico por la hidrólisis de los compuestos cianogénicos de algunos vegetales, entre ellos los citados anteriormente, depende tanto de la biosíntesis de los glucósidos cianogénicos como de la existencia (o ausencia) de sus enzimas de degradación (2, 3). Los glucósidos cianogénicos pueden contener un monosacárido o un disacárido y un hidroxinitrilo aromático. Esto último es el caso de la amigdalina. Tal como ocurre en otras síntesis de compuestos como los glucosinolatos, inicialmente se forma una aldoxima a partir de un aminoácido que, a continuación, es transformada en un nitrilo, seguido de un hidroxinitrilo. Finalmente, se obtiene el glucósido cianogénico mediante diferentes etapas, muchas de ellas aún desconocidas (3, 4).