Estandarización de una prueba de PCR-RFLP para la identificación de Rhodococcus rhodnii en insectos triatominos

Standardization of a PCR-RFLP test for the identification of Rhodococcus rhodnii in triatomine insects

Los triatominos son insectos de importancia en salud pública ya que transmiten el parásito Trypanosoma cruzi, agente causal de la enfermedad de Chagas. Estos insectos en su flora intestinal contienen bacterias del género Rhodococcus, las cuales establecen una relación simbiótica con el triatomino aportándole suplementos nutritivos necesarios para su normal desarrollo y crecimiento. El estudio de estas bacterias tiene gran interés debido tanto a la posibilidad de diseñar estrategias de control paratransgénico, como a las implicaciones de las interacciones que estas bacterias puedan desarrollar con los parásitos dentro del insecto. Dada la dificultad para identificar las bacterias del género Rhodococcus por pruebas tradicionales, en este trabajo se estandarizó una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), seguida de un ensayo de longitud de polimorfismo de fragmentos de restricción para la identificación de Rhodococcus rhodnii aislado de Rhodnius prolixus. Para ello, se amplificó el gen codificante para el ARN 16 S ribosomal bacteriano y los productos obtenidos fueron secuenciados y sometidos a digestión con diversas enzimas de restricción. Los resultados demuestran la aplicabilidad de la prueba de PCR-RFLP para la identificación de R. rhodnii al encontrarse una total correspondencia en el número y tamaño de los fragmentos de restricción obtenidos in vitro e in silico.

INTRODUCCIÓN

Los triatominos son insectos hematófagos pertenecientes a las tribus Rhodniini y Triatomini, las cuales se ubican dentro de la familia Reduviidae, orden Hemiptera. La importancia de estos insectos radica en que son los vectores de Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, así como también de Trypanosoma rangeli, parásito que, aun cuando carece de patogenicidad para el hombre, es de importancia médica por cuanto comparte huéspedes, reservorios y vectores con T. cruzi y ambos tripanosomas presentan reacción inmunológica cruzada (Guhl y Vallejo, 2003; D´Alessandro y Saravia, 1992; 1999; D´Alessandro, 1976).

En Colombia, se han detectado 23 especies naturales vectoras de T. cruzi, siendo las especies vectoriales de mayor importancia en el domicilio y peridomicilio en orden descendente Rhodnius prolixus, Triatoma dimidiata, Triatoma maculata y Triatoma venosa y en el área silvestre y peridomiciliar Rhodnius pallescens y Rhodnius colombiensis, entre otros (Guhl et al., 2003; Jaramillo et al., 2001). Por su parte, los insectos triatominos de los géneros R. prolixus, R. pallescens, R. ecuadoriensis, Rhodnius dallesandroi, Rhodnius pictipes, Rhodnius robustos y más recientemente R. colombiensis, han sido reportados como vectores naturales de T. rangeli (Guhl y Vallejo, 2003; D´Alessandro y Saravia, 1992; 1999, D´Alessandro, 1976).