Análisis inmunofenotípico de muestras normales de médula ósea: aplicaciones en el control de calidad en los laboratorios de citometría

Immunophenotypic analysis of normal bone marrow samples: applications in quality control in cytometry laboratories.

Objetivo. Describir un protocolo estandarizado mediante citometría de flujo para cuantificar en términos absolutos y relativos distintas subpoblaciones celulares de médula ósea normal y analizar la expresión de diferentes marcadores celulares específicos de linaje cuya reactividad está asociada a la diferenciación celular para ser usado como parte del control de calidad de rutina en los laboratorios de citometría. Materiales y métodos. El análisis inmunofenotípico de distintas subpoblaciones celulares se realizó en muestras de MO normal empleando un panel de anticuerpos monoclonales y policlonales útiles para la caracterización fenotípica de leucemias agudas en 4 fluorescencias distintas, con un protocolo que combina marcaje celular de antígenos de membrana y de citoplasma. El análisis de expresión se realizó en términos de intensidad media de fluorescencia. Para el cálculo de recuentos absolutos se adicionaron esferas fluorescentes de concentración conocida. Resultados. El panel de anticuerpos utilizado permitió la identificación y cuantificación de las distintas subpoblaciones leucocitarias normales de origen linfoide y mieloide incluyendo células precursoras CD34+, y poblaciones celulares más diferenciadas incluidas en las líneas granulocítica, monocítica y eritroide. Se establecieron los valores de referencia de las poblaciones celulares y los rangos de expresión de los diferentes marcadores celulares importantes como parte del control de calidad de rutina en los laboratorios de citometría. Conclusión. Los patrones inmunofenotípicos identificados y la determinación de los valores absolutos y relativos de referencia de las distintas poblaciones leucocitarias normales en MO podrán ser utilizados por los laboratorios de citometría como modelo para establecer parámetros de referencia en el análisis fenotípico de neoplasias hematológicas.

INTRODUCCIÓN

La hematopoyesis es un proceso complejo que tiene lugar en la médula ósea (MO), en donde una red de células estromales (nicho medular), citocinas y otros factores de crecimiento regulan la proliferación y diferenciación de células madre progenitoras dando lugar a los distintos tipos de células maduras circulantes en la sangre periférica y otros tejidos (eritrocitos, granulocitos, linfocitos monocitos y plaquetas) (1-6). La introducción de anticuerpos monoclonales en el estudio de la MO normal ha confirmado la gran heterogeneidad de los precursores hematopoyéticos y de los linajes derivados a partir de estas células, demostrando que los cambios morfológicos coexisten con distintos patrones de expresión inmunofenotípicos asociados a diferenciación celular (3).