Aislamiento y caracterización de células “stem” mesenquimales de médula ósea humana según criterios de la Sociedad Internacional de Terapia Celular

Isolation and characterization of mesenchymal stem cells from human bone marrow according to the criteria of the International Society for Cellular Therapy.

La médula ósea (MO) es una fuente importante para el aislamiento de células “stem” mesenquimales (CSM) útiles en terapias de regeneración tisular e inmunomodulación. Objetivo. Aislar y caracterizar células “stem” mesenquimales obtenidas de MO según los criterios exigidos por la Sociedad Internacional de Terapia Celular. Materiales y métodos. Se recolectaron muestras de MO de donantes voluntarios que asistían al Servicio de Ortopedia del Hospital Universitario San Ignacio, Bogotá (Colombia). Se evaluaron las características morfológicas por microscopia invertida y se determinó el inmunofenotipo por citometría de flujo. Se establecieron protocolos de inducción adipogénica, osteogénica y condrogénica mediante el uso de medios de cultivo de específicos y se evaluó la diferenciación utilizando tinciones de aceite rojo ‘O’, fosfatasa alcalina y safranina, respectivamente. Resultados. Se recolectaron 24 muestras de MO de pacientes sometidos a reemplazo total de cadera (volumen de muestra de MO: 5 - 45 ml). Se aislaron células con morfología fibroblastoide a partir de 21 muestras de MO (eficiencia de aislamiento: 87,5 %). En la determinación inmunofenotípica (CSM de MO) no existe diferencia estadísticamente significativa entre los antígenos hematopoyéticos (CD34 y CD45, p>0,05). Entre el antígeno hematopoyético CD45 y los antígenos mesenquimales (CD13, CD44, CD73, CD90, CD105, HLA-I y HLA-DR) existe diferencia estadísticamente significativa (p=0.006). La tinción de aceite rojo ‘O’ reveló la presencia de adipocitos multiloculares, en la inducción osteogénica se observaron centros de mineralización y la condrogénesis fue positiva para la coloración con safranina. Conclusión. A partir de MO se aislaron satisfactoriamente y caracterizaron CSM según los criterios internacionales exigidos.

INTRODUCCIÓN

Las células “stem” mesenquimales (CSM) son células adultas multipotentes capaces de autorrenovarse, generar diversas células diferenciadas y sustentar el proceso de la hematopoyesis. Alexander Friedenstein fue el primero en describirlas en la médula ósea (MO) adulta y en la actualidad se estima su número en 0.001% (1) ó 1:34000 como lo señala Beyer et al (2). Las CSM tienen morfología fibroblastoide, son adherentes “in vitro” y tiene la capacidad de diferenciarse en osteoblastos, adipoblastos y condroblastos (3-5).

La MO es considerada como la fuente principal para el aislamiento de este tipo de células, debido a la posibilidad de aislarla con alta eficiencia y la demostración de su capacidad de diferenciación a diversas tipos celulares mesodérmicos (6).