Temperatura de almacenamiento y cantidad de ARN extraído de plasma materno

Temperature of storage and amount of RNA extracted from maternal plasma

El descubrimiento de los ácidos nucleicos circulantes en plasma materno abrió nuevas posibilidades para el diagnóstico prenatal no invasivo. No obstante, se desconocen los factores que afectan la concentración del ARN de origen feto-placentario en muestras de plasma materno. Fue investigado el efecto del tiempo de almacenamiento (inmediatamente, 4 y 24 horas, 15 y 30 días), temperatura de almacenamiento (4ºC, -20°C y ambiente) y Trizol (con o sin) sobre la cantidad del ARN en muestras de plasma de gestantes, antes de la semana 20 de embarazo. Se analizaron por espectrofotometría 33 muestras de ARN extraídas de plasma La temperatura afecta la concentración de ARN, más que el tiempo de almacenamiento y la adición de Trizol. De igual forma, la cantidad de ARN fue estadísticamente menor en muestras almacenadas a -20°C. El tiempo de almacenamiento y la presencia o ausencia de Trizol no incidió en la concentración de ARN. En conclusión la temperatura es factor clave en la extracción de ARN, donde probablemente el proceso de congelamiento-descongelamiento incide negativamente en la concentración de ARN.

INTRODUCCIÓN

Actualmente, el diagnóstico prenatal requiere de muestras de células fetales obtenidas por vías invasivas, como amniocentesis y toma de muestras de vellosidad coriónica. Estos procedimientos invasivos representan un riesgo para la madre y el feto. Para evitar este riesgo potencial, se han evaluado nuevas estrategias moleculares para el diagnóstico prenatal no invasivo (Ayala-Ramírez et al. 2012). En los últimos años se han logrado grandes avances en este campo. Los estudios se han encaminado en detectar ADN y ARN del feto en el plasma materno utilizando la técnica de PCR en tiempo real (qRT-PCR) la cual ha permitido detectar niveles muy bajos de estas moléculas (Chiu et al. 2005, Hahn et al. 2011, Heung et al. 2009a, Nancy et al. 2009, Ng et al. 2003, Okazaki et al. 2006). Ng et al. (2003) lograron aislar ARN de origen feto-placentario en el plasma y analizaron la expresión de genes específicos de la placenta (Ng et al. 2003). Este descubrimiento fue sorprendente debido a que se cree que generalmente el ARN es más inestable que el ADN y se espera que el ARN libre se degrade rápidamente (Lo & Chiu 2012). Sin embargo, se ha demostrado que el ARN podría estar asociado a lípidos o proteínas, unido al ADN en nucleosomas, cuerpos apoptóticos u otras estructuras vesiculares, por lo que estaría siendo protegido de la degradación por nucleasas (Lo & Chiu 2012). Sin embargo, se ha demostrado que el ARN podría estar asociado a lípidos o proteínas, unido al ADN en nucleosomas, cuerpos apoptóticos u otras estructuras vesiculares, por lo que estaría siendo protegido de la degradación por nucleasas (Lo & Chiu 2012).