Identificación de deleciones en afectados de distrofia muscular de duchenne y becker (DMD/DMB) y diagnóstico de portadoras por metodologías moleculares

Identification of deletions in duchenne and becker muscular dystrophy (DMD/DMB) patients and diagnosis of carriers by molecular methodologies

Se diseñó un ensayo de PCR multiplex (6-plex) que amplifica simultáneamente 6 exones del gen de la distrofina, estos exones son los que presentan mayor frecuencia de mutación. La proporción de deleciones observada en este estudio mediante el sistema 6-plex correspondió al 31,25%, además el 60% del total de las deleciones involucró los exones 44 al 52. Con el fin de identificar mujeres portadoras de DMD y DMB se utilizó el cálculo de dosis génica, a través de esta metodología fueron identificadas 7 mujeres como portadoras y 15 como no portadoras de deleción para los exones analizados, en este estudio no se encontró ninguna mujer como portadora de duplicación. Con la utilización de polimorfismos dinucleotídicos (CA)n localizados en el interior del gen fue posible establecer información sobre el cromosoma X que posiblemente está afectado en el 63% de las mujeres analizadas.

INTRODUCCIÓN

La Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) es una enfermedad hereditaria común en el hombre, afecta a 1 de cada 3.500 varones nacidos vivos; presenta una herencia recesiva ligada al sexo y se caracteriza por debilidad muscular progresiva, pérdida de la capacidad para caminar y lleva a la muerte al final de la segunda década de vida (Abbs S, Clark S., Mathew C.G., Bobrow M., 1991. Álvarez M., Hemández P.M., Perzzuno J.A., 1994. Koenig A., Beggs A.H., Moyer M., Scherpf S., Heindrich K., Bettecken T., Meng G., Muller C.R., Lindloft M., Kaariainen H,. ChapelleA., Kiurus A., Savontaus M.L., GilgenKrantz H., Recan D., Chelly J:, Kaplan J.C., Covone A., Archidiscono N., Romero G., Liecht-Gallati S., Schneider V., Braga S., Moser H., Darras B.T., Murphy P., Francke U., Chen J.D., Morgan G., Denton M., Greenberg C.R., Van Ommen G.J.B., Kunkel L.M., 1989.) La Distrofia Muscular de Becker (DMB), presenta características similares pero menos severas, permite una mayor sobrevida y su frecuencia es menor, aproximadamente 1 de cada 30.000 niños nacidos vivos (Laing N., Siddique T., BertlettR., Yamaoka L., Hung W.Y., Pericak- Vanee M.A., Roses A.D.,1989., Bakel I., Holt S., Craing I., Boyd Y., 1996. Bannerjee M. and Verma I., 1996. Boyd Y., Munro P., Worton R., Monaco T., Kunkel L., Craig I., 1988. Fichebeck K., 1989. Shomrat R., Driks N., Legum C., Shiloh Y., 1992) La DMD y DMB es causada por una variedad de mutaciones como deleciones, duplicaciones y mutaciones puntuales. Las deleciones de uno o más exones del gen de la Distrofina son las más frecuentes, un 65%, seguidas de duplicaciones (15%) y el resto son mutaciones puntuales. El gen de 2,4 Mb se localiza en el brazo corto del cromosoma X en la región p21, está constituido por 79 exones, produce un RNAm de 14 Kb y codifica una proteína de 427 Kd y 3.685 amoniácidos denominada Distrofina (Abbs, S,. 1996. Anderson M. and Kunkel L., 1992. Chamberlain F., Gibbs R.A., Rainer J.E., Caskey T., 1992. Gokgoz N., Cursio C., Bresolin N., Scariato, 1993. Ohledieck K., Matsumura K., Lonasescu V., Towbin J.A., Bosch E.P., Weinstein S.L., Sernett S.W., Campbell K.P., 1993.) Por tratarse de una enfermedad con herencia recesiva ligada al cromosoma X, la mayoría de mujeres de familias con afectados son portadoras y presentan una probabilidad del 50% de tener hijos afectados y 50% de tener hijas portadoras (Chamberlain J., Gibbs RA, Nguyen P, Rainer J, Caskey J, 1998. Clutkow J, Hyser CL, Edwars J.A., Reffner R., Czymy J., 1987. Gutmann D.H., Fischbeck K., 1989. Hejtmancik J.F., Tsao C.C., Harris S.G., Ward P.A., Caskey  C.T., 1986 ).