Study of the stability in real time of cryopreserved strain banks

Estudio de la estabilidad en tiempo real de los bancos de cepas crioconservadas

Se evaluó durante 6 meses la estabilidad a tiempo real de cuatro cepas criopreservadas en 10% v/v de glicerol; Escherichia coli, Bacillus subtilis, Saccharomyces cerevisiae y Aspergillus níger. Los Bancos de Células Primarios (BCP) fueron crioconservados a -70ºC y -20ºC; temperaturas que se combinaron con dos protocolos de descongelación rápido y lento (R y L). El protocolo -70ºC R permitió mayor recuperación, manteniendo la viabilidad de Escherichia coli en 97.6%, a las 48 horas (p: 7.2x10^-4), a los 4 meses (p: 1.5 x10^-4), 5 meses (p: 4.6 x10^-3) y a los seis meses (p: 1.9 x10^-2). Bacillus subtilis reportó viabilidad de 92.5%, a los dos meses (p: 4.7x10^-4), 4 meses (p: 1.76x10^-1), 5 meses (p: 3.4x10^-5) y a los 6 meses (p: 3x10^-2); Saccharomyces cerevisiae reportó 95% de viabilidad a los 2 meses de evaluación (p: 9x10^-3) y Aspergillus niger 94.8%, a las 48 horas (p: 7.2 x10^-4) y a los 4 meses (p: 2.79x10^-2). Los otros protocolos-20ºC R y L generaron cambios en la viabilidad probablemente a causa de la formación de mezclas eutécticas y el desarrollo de los procesos de nucleación y recristalización. La pureza microbiana de todos los bancos se mantuvo en 100% durante el tiempo de estudio.

INTRODUCCIÓN

Un Banco de Células (BC) es un cultivo microbiano puro y homogéneo; almacenado en condiciones que aseguran la viabilidad microbiana y la estabilidad genética (Amador, 1994). Los sistemas de conservación microbiana en general deben restringir la muerte microbiana, evitar los agentes adventicios y prevenir cambios en las características bioquímicas y morfológicas, la secuencia de nucleótidos y la estabilidad de los plásmidos. En el caso de las cepas productoras de metabolitos, se debe preservar la actividad biológica y/o la potencia del metabolito de interés (Kirsop, 1984). Hay muchos métodos descritos para la conservación microbiana (Kirsop 1984; Simione 1991; Gherna 1994; Demain 1996; Hunter-Cevera 1996; NUNC 2000). La selección del método depende de los recursos económicos de cada laboratorio. Para la selección se deben considerar los siguientes criterios: viabilidad, pureza, estabilidad genética, costes del proceso, cantidad de cultivo (para producir microorganismos) y frecuencia de uso (Kirsop 1980).