La tinción de inmunofluorescencia se ha convertido en una herramienta esencial en patología y ciencias biomédicas para identificar células raras, interacciones célula-célula y componentes celulares submicroscópicos. Muchos entornos experimentales, sin embargo, sufren del hecho de que la microscopía de fluorescencia de campo amplio tradicional generalmente se limita a imaginar solo tres o cuatro fluoróforos. Debido a la falta de información morfológica y un límite de detección alto, incluso la citometría de flujo, que es capaz de teñir 20 o más fluoróforos al mismo tiempo, está limitada en su aplicabilidad, especialmente en áreas como la detección de células raras. Otros enfoques avanzados de imagen, como la microscopía confocal de barrido láser y la citometría de flujo de imagen, pueden estar abordando estas deficiencias, pero a su vez requieren un sofisticado procesamiento de datos posterior y una alta inversión de capital. Aquí, describimos un nuevo método y configuración de filtro para emplear rutinariamente hasta siete fluoróforos en un microscopio de fluorescencia de campo amplio tradicional equipado con una fuente de luz de mercurio de alta presión estándar. La cuantificación de la interferencia entre canales y la imagen de siete colores reales de células cancerosas mezcladas con leucocitos demuestran que no es necesario utilizar algoritmos de corrección de compensación digital. Nuestra configuración permite así un análisis detallado de poblaciones celulares raras, la co-localización de antígenos y la morfología celular en un entorno de laboratorio de investigación o rutina estándar.