Si bien existen muchos métodos para determinar cuantitativamente las actividades de las proteínas quinasas, los ensayos radioactivos basados en fosfato siguen siendo la principal herramienta de muchos laboratorios debido a su alta sensibilidad, alta relación señal-ruido, falta de interferencia por moléculas pequeñas fluorescentes y absorbentes de luz, y facilidad de cuantificación. Aquí demostramos que la interacción entre el dominio asociado a Forkhead (FHA) de la levadura Rad53 y un péptido optimizado para la fosforilación por la Proteína Quinasa Activada por AMP (AMPK), que previamente ha sido explotado para la generación de sensores de fosforilación intracelular, puede servir como una medida para un ensayo de quinasa AMPK de dos pasos extremadamente sensible con una relación señal-ruido excepcional.