Toxicidad del BPA durante el desarrollo del embrión de pez cebra
Autores: Scopel, C. F. V.; Sousa, C.; Machado, M. R. F.; Dos Santos, W. G.
Idioma: Inglés
Editor: Takako Matsumura-Tundisi
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Licencia
CC BY – Atribución
Consultas: 26
Citaciones: Sin citaciones
El bisfenol A (BPA) es un monómero utilizado en la producción de policarbonato, un polímero común en plásticos, resinas epóxicas y papel térmico. La presencia de BPA en alimentos, agua, aire y polvo ha sido motivo de gran preocupación en los últimos años, no solo por cuestiones ambientales y ecológicas, sino también por su supuesto riesgo para la salud pública relacionado con su potencial mutagénico y carcinogénico. En este estudio, evaluamos la toxicidad del bisfenol A en embriones de pez cebra (Danio rerio) y determinamos la concentración letal del 50 % (CL50) de esta sustancia química. El BPA se utilizó en concentraciones que oscilaban entre 1 μM y 100 μM en medio E3/0,5 % de dimetilsulfóxido (DMSO) a partir de soluciones madre previamente preparadas en DMSO al 100 %. Los controles incluyeron embriones expuestos únicamente al medio E3 o suplementados con DMSO al 0,5 %. Se utilizó camptotecina (CPT), un conocido inhibidor de la proliferación celular, como control positivo a una concentración de 0,001 μM en medio E3/0,5 % DMSO. Se colocaron peces cebra adultos para la cría un día antes del experimento; posteriormente, se recolectaron y seleccionaron embriones viables. Los experimentos se realizaron por triplicado, según las especificaciones de la Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos (OCDE). Se distribuyó un embrión por pocillo (25 embriones por concentración) en microplacas de 96 pocillos, en presencia o ausencia de los productos químicos. Las placas se mantuvieron en incubadoras de DBO a una temperatura controlada de 28,5 °C y con un fotoperiodo de 14 h de luz y 10 h de oscuridad. Tras 24, 48, 72 y 96 h de exposición, los embriones expuestos se evaluaron según los siguientes parámetros: mortalidad, coagulación, frecuencia cardíaca, eclosión y presencia de anomalías morfológicas. Se tomaron fotografías mediante fotomicroscopía. La apoptosis se evaluó mediante un ensayo de escalera de ADN. El ADN se extrajo mediante el método de fenol:cloroformo y se analizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%. Los fragmentos de ADN se visualizaron tras la tinción con bromuro de etidio en un transiluminador ultravioleta. La CL50 determinada para el BPA fue de 70 μM tras 24 horas, 72 μM tras 48 horas, 47 μM tras 72 horas y 31 μM tras 96 horas de exposición. El BPA indujo alteraciones morfológicas y fisiológicas, como edema del saco vitelino y del pericardio, retraso o inhibición de la eclosión, deformación de la columna vertebral, disminución de la frecuencia cardíaca y mortalidad. En conclusión, este estudio demostró que el BPA indujo malformaciones marcadas en embriones de pez cebra en concentraciones superiores a 25 μM, lo que corrobora las preocupaciones actuales relacionadas con la presencia generalizada de BPA en el aire, los alimentos y el agua utilizados por los humanos, así como en los fluidos y tejidos corporales.
Descripción
El bisfenol A (BPA) es un monómero utilizado en la producción de policarbonato, un polímero común en plásticos, resinas epóxicas y papel térmico. La presencia de BPA en alimentos, agua, aire y polvo ha sido motivo de gran preocupación en los últimos años, no solo por cuestiones ambientales y ecológicas, sino también por su supuesto riesgo para la salud pública relacionado con su potencial mutagénico y carcinogénico. En este estudio, evaluamos la toxicidad del bisfenol A en embriones de pez cebra (Danio rerio) y determinamos la concentración letal del 50 % (CL50) de esta sustancia química. El BPA se utilizó en concentraciones que oscilaban entre 1 μM y 100 μM en medio E3/0,5 % de dimetilsulfóxido (DMSO) a partir de soluciones madre previamente preparadas en DMSO al 100 %. Los controles incluyeron embriones expuestos únicamente al medio E3 o suplementados con DMSO al 0,5 %. Se utilizó camptotecina (CPT), un conocido inhibidor de la proliferación celular, como control positivo a una concentración de 0,001 μM en medio E3/0,5 % DMSO. Se colocaron peces cebra adultos para la cría un día antes del experimento; posteriormente, se recolectaron y seleccionaron embriones viables. Los experimentos se realizaron por triplicado, según las especificaciones de la Organización para la Cooperación y el Desarrollo Económicos (OCDE). Se distribuyó un embrión por pocillo (25 embriones por concentración) en microplacas de 96 pocillos, en presencia o ausencia de los productos químicos. Las placas se mantuvieron en incubadoras de DBO a una temperatura controlada de 28,5 °C y con un fotoperiodo de 14 h de luz y 10 h de oscuridad. Tras 24, 48, 72 y 96 h de exposición, los embriones expuestos se evaluaron según los siguientes parámetros: mortalidad, coagulación, frecuencia cardíaca, eclosión y presencia de anomalías morfológicas. Se tomaron fotografías mediante fotomicroscopía. La apoptosis se evaluó mediante un ensayo de escalera de ADN. El ADN se extrajo mediante el método de fenol:cloroformo y se analizó mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%. Los fragmentos de ADN se visualizaron tras la tinción con bromuro de etidio en un transiluminador ultravioleta. La CL50 determinada para el BPA fue de 70 μM tras 24 horas, 72 μM tras 48 horas, 47 μM tras 72 horas y 31 μM tras 96 horas de exposición. El BPA indujo alteraciones morfológicas y fisiológicas, como edema del saco vitelino y del pericardio, retraso o inhibición de la eclosión, deformación de la columna vertebral, disminución de la frecuencia cardíaca y mortalidad. En conclusión, este estudio demostró que el BPA indujo malformaciones marcadas en embriones de pez cebra en concentraciones superiores a 25 μM, lo que corrobora las preocupaciones actuales relacionadas con la presencia generalizada de BPA en el aire, los alimentos y el agua utilizados por los humanos, así como en los fluidos y tejidos corporales.